封闭血清的原理是什么?

2022-03-10 08:44:22 阅读次数:

  
 
  封闭血清的原理主要有两点:
 
  一是待检样本会非特异性的和蛋白结合,从而导致背景过高,因此可以用BSA或血清封闭掉这部分非特异性的结合,从这点看,BSA和血清没有明显区别。
 
  二是待检样本中可能会有Fc受体,可以和抗体恒定区结合,与抗体特异性无关,封闭血清中有抗体,因此用血清可以封闭掉一抗及二抗和样本Fc受体之间结合。BSA则无法封闭Fc受体。
 
  所以二抗来源的动物血清封闭的是组织上带电荷基团。因为组织中非抗原抗体反应出现的非特异性背景染色,*常见的原因是蛋白吸附于高电荷的胶元和结缔组织成分上。这并不影响接下来一抗的结合,因为这种结合是特异的,亲和力远远高于因电荷作用的结合,因此会竞争胜出。
 
  免疫组化中用血清封闭的较多。封闭血清一般选择和二抗同一来源的(如一抗为兔来源多抗,二抗为山羊抗兔IgG,那封闭液就用山羊血清),血清中动物自身的抗体,预先能和组织中有交叉反应的位点发生结合,否则在后面的步骤中如果和二抗发生结合,会造成背景。但要注意封闭用血清中不能含有目标蛋白,且与一抗来源不同。另外二抗因尽量少选取兔子或老鼠来源的,因为这两个在亲缘关系上和人类非常接近,所以产生交叉反应的机会就比较大,从而导致背景比较高。!适合选用来源于驴,山羊,绵羊等的二抗,背景相对就很低。