1. 省略一抗
这是测试由二级试剂引起的潜在背景的有用且重要的控制。然而，这个实验没有提供关于一抗质量的信息。
2.抗体信号与文献数据一致
WB 中观察到的分子量、组织分布和染色模式与文献一致。这种验证方法很容易执行，但也有一些局限
3. 转染细胞以过表达靶抗原
在表现出弱内源性表达或无内源性表达的细胞系中，过表达靶蛋白可以给出抗体特异性的问题。通过这种方法可以很容易地评估与同一蛋白质的不同亚型的反应性。然而，人为的高水平靶蛋白通常不能反映内源性表达水平。组织或细胞裂解物中预期大小或定位的干净信号，已知含有目的蛋白质，结合过表达系统中的阳性结果，是特异性的良好指标。
4.KO细胞或组织
KO(Knock-out)敲除测试抗体特异性的金标准。与野生型相比，KO中的信号丢失是特异性的zui可靠证据。请记住，在蛋白质印迹中成功的KO验证并不能保证在其他应用中的特异性。不幸的是，KO细胞或组织并不总是可用的。
5.KD-细胞或组织
KD(Knock-down)目标的敲低也可以告诉您很多关于抗体特异性的信息。与KO相比，通过 RNAi下调蛋白质通常更快、更容易完成。根据降低的mRNA水平，与对照系统相比，KD模型中的信号或染色应减少。
6.IP或ELISA应用的IP/MS验证
沉淀 (IP)以及随后通过质谱(MS)进行的蛋白质鉴定是分析IP或ELISA应用的抗体特异性的强大工具。然而，这种方法并没有告诉您很多关于其他应用中抗体特异性的信息。
7.针对同一目标不同表位的抗体
这种验证方法可以提供有关抗体特异性的宝贵数据，尤其是在染色或蛋白质印迹应用中。用针对同一目标但具有不同表位的抗体获得的匹配染色模式为其特异性提供了很好的证据。结合靶蛋白不同部分的不同抗体不太可能具有相同的非特异性结合配偶体。
