样品固定：将待检测的样品进行固定处理，以保持结构完整并防止后续步骤中的损伤。
阻断非特异性结合：使用适当的阻断试剂(如牛血清蛋白、小鼠IgG等)阻断非特异性结合位点，减少干扰信号。
抗体孵育：将特异性抗体加入样品中，与目标分子或细胞发生特异性结合。
洗涤：洗去未结合的抗体和其他非特异性成分，以减少背景干扰。
二次抗体孵育：如果一抗不直接可视化，需要加入与一抗发生特异性结合的二抗(通常是被偶联到荧光染料、酶或其他探针的抗动物源二抗)。
再次洗涤：洗去未结合的二抗和其他非特异性成分。
可视化或检测：根据实验设计的需要，选择合适的方法来可视化或检测已标记的抗体。例如，荧光显微镜观察、酶标法、放射性测量等。
数据分析：对标记结果进行定量或定性分析，并进行数据解读和统计处理。
